CCK-8试剂盒(细胞增殖及毒性检测试剂盒) EK-5103-500T

CCK-8试剂盒(细胞增殖及毒性检测试剂盒)使用说明书

【包装规格】

【保存条件】

4℃避光保存年有效，-20℃避光保存两年有效。

【概述】

Cell Counting Kit-8试剂盒简称CCK-8试剂盒，可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。因此可利用这特性直接进行细胞增殖和毒性分析。该试剂主要用途有：药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验。

【使用方法（仅供参考）】

1. 用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量。通常细胞增殖实验每孔加入100μl 2×103个细胞，细胞毒性实验每孔加入100μl 5×103个细胞(具体每孔所用的细胞的数目，根据细胞的大小、细胞增殖速度的快慢等因素决定，推荐进行预实验选择合适的细胞数量)。按照实验要，进行培养并给予0-10μl特定的药物刺激。

2. 每孔加入10μl CCK-8溶液（如果起始的培养体积为200μl，则加入20μl CCK-8溶液，其它情况以此类推）。可以用加了相应体积细胞培养液和CCK-8溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。如果担心所使用的药物会干扰检测，设置加了相应量细胞培养液、药物和CCK-8溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。

3. 在细胞培养箱内（37°C）继续孵育0.5-4小时，对于大多数情况孵育1小时即可。时间的长短根据细胞的类型和细胞的密度等实验情况而定，初次实验时可以在0.5、1、2和4小时后分别用酶标仪检测，然后选取吸光度范围比较适宜的时间点用于后续实验。

4. 在450nm测定吸光度。可以使用吸光度在430-490nm之间的滤光片，但是450 nm滤光片的检测灵敏度高。

5. 计算方法

细胞存活率 = [(As-Ab) / (Ac-Ab)]×100%

抑制率 = [(Ac-As) / (Ac-Ab)]×100% As：实验孔(含有细胞的培养基、CCK-8、待测物质) Ac：对照孔(含有细胞的培养基、CCK-8、没有待测物质)

Ab：空白孔(不含细胞和待测物质的培养基、CCK-8)

【注意事项】

1. 初次实验可选择3-5个孔进行预实验选择合适的细胞数量。

2. 由于使用96孔板进行检测，如果细胞培养时间较长，定要注意蒸发问题。方面，由于96孔板周围圈容易蒸发，可以采取弃用周围圈的办法，改加相同量的PBS、水或培养液；另方面，可以把96孔板置于靠近培养箱内水源的地方，以缓解蒸发。

3. 当有还原性物质存在时会影响CCK- 8的测定，增加OD值；在有氧化性物质存在时会抑制测定反应的发生，减小OD值；在有酚红存在的情况下，会增加空白吸收，但不影响测定，扣除空白吸收即可。

4. 在做加药实验时，如果药物具有还原性，就会和CCK- 8试剂发生显色反应，增加吸光度。解决办法：首先要确认药物是否有吸收，在含有药物的培养基中加入CCK- 8，测定450 nm的吸光度，如果它的吸光度比不含药物的培养基 (只加CCK-8) 的吸光度高，则证明药物有影响，可在加CCK- 8之前更换培养基，去掉药物的影响。

5. 如果测定的OD值太低可适当增加细胞数量或延长加入CCK-8溶液后的染色时间。

6. 用酶标仪检测前确保每个孔内没有气泡，否则会干扰测定。

7. 仅用于实验室，不适合农业/家庭/临床用途使用。

8. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴次性手套操作。